نظر به تعداد قابل توجه ستونهای C18 در دسترس آزمایش فازهای ساکن متعدد به روش آزمون و خطا برای حل مشکلی جدید کاری نامعقول است. اگر اطلاعات بیشتری ندارید، باید سعی کنید تا انتخابتان را محدود سازید قوانین کمی در این مورد وجود دارد.
راه حل
به عنوان اولین محدودیت خواص ارائه شده برای گونه مورد نظر سودمند است:
حلالیت
ماهیت شیمیایی
وزن مولکولی
برای شروع باید تصمیم بگیرید که آیا گونه مورد نظر اصولاً می تواند بر روی فاز ساکن C18 و در سیستم فاز معکوس کلاسیک جداسازی شود. پس از آن می توانید برخی از ستونها را بر اساس خصوصیات جسم حل شده کنار گذاشته و بر روی برخی دیگر متمرکز شوید.
خصوصیات جسم حل شده و انتخاب ستون
|
خصوصیات جسم حل شده حلالیت |
این خاصیت به من چه میگوید؟ |
|
نمونه تنها در هگزان / هیتان محلول است
|
نمونه تا حد زیادی غیر قطبی است شستشو بر روی ستون C18 به احتمال بسیار زیاد مشکل است. انتخاب دیگر CN SiO2 یا NH2 |
|
نمونه در آب نامحلول است |
از کروماتوگرافی غیر آبی استفاده کنید C18 : فاز متحرک استونیتریل / THF / متانول. |
|
نمونه در حلال اسیدی یا بازی محلول است و به احتمال بسیار زیاد می توان آن را در همان حلال تجزیه کرد |
از ستون C مناسب استفاده کنید بخش زیر را ببینید. |
|
ماهیت شیمیایی اجسام حل شده قطبیت مشابهی دارند و تنها اختلاف ساختاری کمی وجود دارد |
در این مورد ستون C18 نسبتاً غیر گزینش پذیر است شاید فازهای ساکن C قطبی مناسب باشند؛ گزینه بهتر CN SiO2 یا NH و میکروسلولز است. |
| تمام اجسام حل شده یونی هستند | فاز ساکن C18 و واکنشگرهای زوج یون موجود در فاز متحرک یا ستونهای مبادله گریون دو گزینه مناسب هستند. |
|
نمونه دارای اجسام حل شده اسیدی است(pH) را اندازه بگیرید). |
بیشتر ستون های جدید با اسید مشکل دارند. از ستون های کلاسیک قدیمی مثل Nucleosil 100 یا Resolve ODS Hypersil استفاده کنید. از بافر اسیدی به عنوان شوینده استفاده کنید |
| نمونه حاوی اجسام حل شده بازی است. | فازهایی که پوشش دار نشده اند همچون ,Hyper Sil ODS Resolve oder LiChrospher را به کار نگیرید. اگر مجبورید چنین کاری بکنید باید به شوینده یک آمین بیافزایید |
|
نمونه حاوی اجسام حل شده غیر یونی ولی بسیار قطبی است. |
اگر قصد دارید از ستون C18 استفاده کنید، ستونی با درصد کربن بالا (بالای ۱۸ درصد) انتخاب کنید تا با فازهای متحرک مائی ستون عمر بیشتری داشته باشد. ممکن است این فازها بهتر باشند Phenyl,CN ,C4 ,diol |
|
وزن مولکولی (الف) ٤٠٠ ≥ وزن مولکولی گونه ها≥ 250 |
ممکن است که اثرات طرد مولکولی را با فاز ساکن Si60 برای این محدوده نسبتاً گسترده جرم مولکولی ببینید؛ برخی از پیک ها ممکن است قبل از tm شسته شوند زیرا اندازه حفره ها Si60 تنها ۶۰ آنگسترم است. ممکن است برای افزایش گزینش پذیری مایل باشید از دو سازوکار (طرد و جذب) استفاده کنید. پس ستون - Si60 ایده آل است. جداسازی مشتقات فنل، مثال خوبی در این زمینه است. |
|
(ب) ۸۰۰ ≥وزن مولکولی گونه ها ≥ ٤٠٠ |
در یک جداسازی ایزوکراتیک ترکیبات بزرگتر به آهستگی از ستون C18 شسته میشوند؛ در شرایط گرادیان حلال هیچ مشکلی به وجود نمی آید. گزینه های دیگر برای روش ایزوکراتیک C1 ,C4 ,C8 و مواد غير متخلخل (NPS) هستند. |
|
(ج) ۲۰۰۰≥ وزن مولکولی گونه ها≥ ۸۰۰ |
جداسازی در روش گرادیان با ستونهای کوتاه امکان پذیر است؛ گزینه دیگر، کروماتوگرافی طرد اندازه است. |
اگر قرار است اسیدها یا بازهای قوی با ستونهای فاز معکوس جدا شوند واکنشگرهای تشکیل دهنده زوج یون به شوینده اضافه میشود واکنشگرهای PIC - A همچون دی بوتیل یا تترابوتیل آمونیوم فسفات یا کلراید (5/7=pH) برای جداسازی اسیدها مناسب اند. واکنشگرهای PIC-B همچون B5 تا B10، پنتا - تا دکا سولفونیک اسید (5/3=pM) برای جداسازی بازها مناسب اند.
نتیجه گیری
در صورتی که اطلاعاتی در مورد فازهای ساکن مورد نظرتان ندارید و یا راهی برای به دست آوردن آن وجود ندارد این قوانین را میتوانید به عنوان راهکارهای جایگزین در نظر داشته باشید. اغلب ساده تر آن است که برای انتخاب ستون مناسب به کمک مشتری تان تکیه کنید یا از فروشنده ستون سوال کنید و یا بررسی کتابخانه ای مفصلی انجام دهید.
